Neonatal screening for four lysosomal storage diseases with a digital microfluidics platform: Initial results in Brazil.

We describe the initial results of a neonatal screening program for four lysosomal storage diseases (MPS I, Pompe, Gaucher and Fabry) using the digital microfluidics methodology. The method successfully identified patients previously diagnosed with these diseases and was used to test dried blood spot samples obtained from 10,527 newborns aged 2 to 14 days. The digital microfluidic technology shows potential for a simple, rapid and high-throughput screening for these four diseases in a standard neonatal screening laboratory.

Incidence of cystic fibrosis in five different states of Brazil as determined by screening of p.F508del, mutation at the CFTR gene in newborns and patients.

Cystic Fibrosis (CF) is one of the most common single-gene defects in European descent populations with an incidence of about 1 in every 2500 live births and carrier frequency of approximately 1 in 25. The most common mutation at the CF transmembrane conductance regulator (CFTR) gene is a deletion (p.F508del) of the phenylalanine codon 508; its frequency, however, is not the same throughout the world. The purpose of this paper is to document an application of a two-tier survey design in different states of Brazil, from which regional differences of the incidence of CF and frequency of CF-causing mutation(s) carriers can be for the first time estimated. We present data on genotype distributions in reference to p.F508del mutation in samples of newborns, adult controls and CF patients from five Brazilian states, in which a total of 2683 newborns born to Brazilian white parents and 500 African-Brazilians adult controls were screened, as well as 300 CF patients (262 European descents and 38 African descents) were genotyped. Our results suggest that the CF-incidence in different parts of Brazil may differ by almost 20-fold. For the five different states as a whole, nearly 48% of the CF-alleles carry the p.F508del mutation, which places the estimates of disease incidence and carrier frequencies for the Brazilian European descents as 1 in 7576 live births and 2.3%, respectively. The implications for prevention of CF and other rare Mendelian diseases through such surveys of mutation screening are discussed.

Triagem neonatal para hemoglobinopatias: um estudo piloto em Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil / Neonatal screening for hemoglobinopathies: a pilot study in Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil

This study was conducted to establish the frequency of hemoglobinopathies among newborns undergoing screening tests for metabolic diseases at the University Hospital (Hospital de ClÝnicas) in Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brazil. Testing for abnormal hemoglobins was performed by isoelectric focusing electrophoresis on agarose gel with blood obtained by heel stick and applied to filter paper. For confirmatory testing of abnormal neonatal screening, a venopuncture blood sample was obtained from the infant and parents and then submitted to hemoglobin electrophoresis on cellulose acetate at pH 8.6 and citrate agar at pH 6.2. A total of 1,615 subjects were studied: 20 samples showed the Hb S pattern and six samples showed Hb C. Thus, frequency of the sickle cell gene was 1.2 and that of the Hb C gene was 0.4, regardless of race or origin. These data suggest that the inclusion of universal neonatal screening for hemoglobinopathies in the ongoing projects for the detection of phenylketonuria and congenital hypothyroidism has many advantages and should be considered in health programs.

Tireotropina em sangue seco em papel filtro: uma nova alternativa de uso do kit ACS: 180 TM em luminômetros manuais ou semi-automáticos / Thyrotropin in dried blood filter paper - the alternative use for TSH-ACS - 180 TM kit in manual or semi-automatic luminometers

A quantificaçäo da tireotropina é empregada em programas de triagem neonatal para o diagnóstico precoce do hipotireoidismo congênito e do seu tratamento preventivo, evitando as irreversíveis seqüelas neurológicas decorrentes da doença. Além dos kits comerciais disponíveis no mercado, outras alternativas "domésticas", de menor custo, já foram previamente descritas. Neste trabalho é apresentada uma adaptaçäo para a quantificaçäo de tireotropina em sangue seco em papel filtro a partir de um kit desenvolvido para a quantificaçäo sérica da tireotropina por quimioluminescência em equipamento de automaçäo, com resultados superiores aos obtidos pelo método empregado na nossa rotina.

Um método simples e rápido para a quantificação de galactose em soro e urina / A simple and rapid method for the measurement of galactose in serum and urine

A galactose presente na circulação ou excretada na urina tem interesse clínico em duas situações: 1) confirmação do diagnóstico ou acompanhamento de pacientes galactosêmicos; 2) em teste de tolerância à lactose, no qual a interpretação é feita rotineiramente de forma indireta pela avaliação da glicemia. Na há disponível no mercado nacional “kit” comercial para a dosagem da galactose em líquidos biológicos. Neste trabalho, descreve-se um método rápido e simples para medida da galactose em soro ou urina.

Tirosemia neonatal transitória: uma alteraçäo freqüente / Transient neonatal tyrosinemia: a frequent abnormality

Objetivos: Avaliar a freqüência da tirosinemia neonatal transitória, com ou sem hiperfenilalaninemia secundária, observada através da triagem neonatal para erros inatos do metabolismo ("teste do pezinho"), e a necessidade de monitoramento e eventual intervençäo medicamentosa o/ou dietética em casos específicos. Métodos: Foram analisadas 457.870 amostras de sangue seco obtido por punçäo de calcâneo de crianças de 3 a 20 dias de vida, através de cromatografia qualitativa de aminoácidos em camada delgada. Os casos positivos foram confirmados quantitativamente em amostras séricas pelas dosagens fluorimétricas da tirosina e da fenilalanina. Resultados: 1.231 amostras de sangue seco impregnado em papel filtro apresentaram resultados positivos para tirosina na avaliaçäo cromatográfica. A análise sérica por método fluorimétrico revelou valores normais de tirosina e fenilalanina em 822 pacientes; os restantes 409 apresentaram tirosina elevada e foram divididos em três grupos de acordo com a concentraçäo de tirosina observada. Em 118 destes pacientes foram observados também níveis de fenilalanina superiores ao limite de referência. Conclusöes: A tirosinemia neonatal transitória é um distúrbio muito freqüente em recém-nascidos (1/372), sendo que em alguns casos também säo registrados elevados níveis de fenilalanina. Enquanto näo estiver demonstrado que esse achado é completamente inócuo, o monitoramento desses pacientes e o eventual emprego de medidas que reduzem os níveis de tirosina e fenilalanina devem ser considerados pelo pediatra.

Valores basais de LH e FSH em crianças e adolescentes normais determinados através do método da quimioluminescência / Basal values of LH and FSH in normal children and adolescents determined by chemiluminescence method

Com a finalidade de estabelecer valores referenciais para as concentraçöes basais de gonadotrofinas séricas avaliadas através do método de quimioluminescência, foram dosados o LH e o FSH em 148 crianças e adolescentes nos vários estágios puberais. Para os meninos, o valores de LH e FSH, em UI/L, expressos como média e intervalo de confiança, foram no estágio I 1,00 (0,47-1,53) e 1,78 (1,26-2,30); no estágio II, 1,16 (0,39-1,94) e 3,31 (2,08-4,53); no estágio III 2,28 (1,45-3,12) e 3,71 (2,56-4,85) e, nos estágios IV e V 4,10 (3,25-4,94) e 8,94 (4,48-13,40). Nas meninas, os valores foram no estágio 10,48 (0,34-0,62) e 3,50 (2,58-4,42); noestágio II, 1,92 (-0,12-3,96) e 5,93 (2,34-9,53); no estágio III 4,41 (1,85-6,96) e 8,40 (6,07-10,73) e, nos estágios IV e V 6,39 (4,00-8,78) e 7,57 (5,35-9,80). A porcentagem de valores indetectáveis foi de 9,45 para o LH e 3,37 para o FSH, todos os casos ocorrendo nos estágios I e II da puberdade. Foram observadas diferenças significativas entre os valores pré-puberais e os encontrados a partir do estágio III de puberdade. Constatou-se, no entanto, a ocorrência de sobreposiçäo de valores nos diferentes estágios do desenvolvimento puberal.

Avaliaçåo de um método enzimático-colorimétrico no diagnóstico neonatal da galactosemia / Evaluation of an enzymatic colorimetric method failure of neonatal galactosemia

A galactosemia é um erro inato do metabolismo caracterizado por uma falha enzimática no catabolismo da galactose. A verificaçåo dos níveis séricos dos metabólitos tem-se prestado como um instrumento fiel na identificaçåo desta doença em programas de triagem neonatal. No presente trabalho, avaliamos um método enzimático colorimétrico para a determinaçåo de galactose e galactose-I - fosfato em amostras de sangue total em, papel filtro. A variaçåo interensaios foi de 12,4 e 10,0 por cento para controles líquidos de 15,0 e 30,0 mg/dl fornecidos pelo fabricante e 10,0; 9,6 e 6,5 por cento para amostras de sangue total em papel filtro obtidas junto ao Center for Disease Control and Prevention (CDC), Atlanta, EUA, com valores de 5,1; 31,2 e 16.0 mg/dl respectivamente. Os níveis de normalidade obtidos através do percentil de 95 por cento da média de 1.547 amostras testadas foi de valores indetectáveis a 14,0 mg/dl

Uma experiência terapêutica no manejo da doença da urina do xarope do bordo / Management of a case of maple syrup urine disease-the use of gluco-insulinotherapy

Relata-se aqui o manejo terapêutico realizado em um paciente portador da Doença da Urina do Xarope de Bordo, com diagnóstico e encaminhamento tardios (2 a 5 meses). Uma vez que o paciente apresentava níveis extremamente elevados de leucina no plasma(1956 micromoles/L, para um normal de até 77), houve necessidade de se realizar uma glicoinsulinoterapia nos primeiros dias de tratamento, seguida posteriormente da dieta específica para esta doença (hipercalórica e restrita em aminoácidos de cadeia ramificada). Além de uma breve revisäo sobre o assunto, os autores enfatizam as grandes dificuldades de se realizar um diagnóstico precoce e de se obter fórmulas alimentares específicas para esta doença no Brasil.

Neopterina: um marcador da resposta imune mediana por células no líquido céfalo-raquidiano? / Neopterin: a marker of the cell-mediated immune response in the cerebrospinal fluid?

A neopterina é sintetizada por macrófagos ou monócitos sob o estímulo de fatores derivados de infócitos T ativada e tem sido utilizada como importante marcador de rejeição de órgãos em pacientes submetidos a transplante, no monitoramento de pacientes com tumores, doenças autoimunes e como triagem para doenças infecciosas em doadores de sangue. Estudamos o comportamento da neopterina em líquido céfalo-raquidiano e soro de pacientes pediátricos normais e com meningites, antes e durante o tratamento. Os resultados obtidos mostraram boa correlação dos níveis de neopterina no soro x LCR e estreita correlação do aumento da neopterina no LCR com a presença ou não de doença infecciosa a nível de meninges.

Quimioluminescencia para TSH neonatal em papel filtro / Chemiluminescence for neonatal TSH in filter paper blood spot

Um metodo de quimioluminescencia para a determinaçao dos niveis de TSH em papel filtro foi adaptado a partir de um kit comercial. Uma pre-eluiçao da amostra e requerida e o teste pode ser realisado em um curto tempo de incubaçao ou de um procedimento overnigth. Estudos comparativos com o sistema Delfia e os resultadosobtidos com 56.803 amostra sao apresentados, demonstrando que este procedimento pode ser utilizado em programas de rastreamento do hipotireoidismo congenito.